肝素親和填料使用方法

點(diǎn)擊次數：220 發(fā)布時(shí)間：2024/6/27 9:46:21

肝素親和填料使用方法

Heparin NUPharose FF和 Heparin NUPharose HP是肝素親和填料，是經(jīng)典的瓊脂糖凝膠層析介質(zhì)基球 NUPharose上鍵合肝素而成。 FF為 Fast Flow的縮寫(xiě)，具備快流速的特點(diǎn)，可用于快速純化蛋白質(zhì)，適用性廣，易于放大。 HP為 High Performance的縮寫(xiě)，具備分辨率高的特點(diǎn)。肝素親和的原理較為復雜，一般認為肝素與蛋白的結合是離子相互作用、氫鍵與范德華力等多種驅動(dòng)力共同作用的結果。肝素填料主要用于凝血酶 III、凝血因子、脂蛋白、酯酶、激素、干擾素等的分離純化。也有文獻報道將肝素填料用于外泌體的純化。產(chǎn)品留了瓊脂糖極好的親水性及大網(wǎng)架結構，與生物活性大分子有很好的相容性，具有載量高，非特異性吸附少，流速快等特點(diǎn)，適用于各種肝素親和層析。

使用方法參考

1、色譜柱裝填

以下闡述與層析系統連接時(shí)，填料的色譜柱裝填方法。

1 所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體做脫氣處理。

2）填料用量計算：通過(guò)沉降定量填料體積，需要的沉降填料體積 =柱體積× 壓縮比（也稱(chēng)壓縮因子）。沉降體積是指填料在 20%乙醇保存液中自然沉降完全讀取的穩定體積。 Heparin NUPharose FF的壓縮比為 ~1.15 Heparin NUPharose HP的壓縮比為 ~1.20。為使達到裝柱比，可通過(guò)柱頭下壓的方法，也可以通過(guò)高流速壓柱。

3）填料清洗：將填料懸液充分搖勻后量取相應體積，抽去液體，并用約 3倍填料體積的純化水洗滌，重復 3次，以除去保存液。

4）裝柱填料懸液準備：將填料轉移到適當的容器中，加入適量的裝柱液，制成50~75 v%的裝柱填料懸液原包裝中填料體積分數為使用前攪勻。

5 裝填前準備：在清洗干凈的層析柱下端加入裝柱液，以除去下墊片及層析柱下端的空氣，在柱內保留少量的蒸餾水擰緊下堵頭，調整柱子使其垂直于地面。

6 裝填將攪勻后的填料懸液一次性緩慢倒入層析柱內（必要時(shí)使用裝柱器）為避免引入氣泡，應使之沿層析柱內壁自然流下。將所有填料加入后，用裝柱液將裝柱器加滿(mǎn)，擰緊裝柱器上蓋，將柱子與層析系統連接。

7）壓柱：使柱內填料自然沉降（或 50~150 cm/h的低流速下沉降），待填料沉降完全后（填料與液體的界面清晰），去除裝柱器裝上上柱頭，并將柱頭下降至界面處通過(guò) 高流速（推薦流速見(jiàn)下表，注意柱壓不超過(guò) 0.3 MPa 繼續壓柱至界面清晰穩定，標記界面穩定時(shí)的柱高。停泵，打開(kāi)柱頭上的閥門(mén) /堵頭，關(guān)閉柱底的閥門(mén) /堵頭，下壓柱頭至標記位置下方與壓縮比對應的位置，旋緊柱頭，裝柱完成。裝柱完成后，需用高流速平衡柱內的填料。